鑒于HPLC在全行業(yè)運(yùn)用越來(lái)越廣泛，因此每一個(gè)實(shí)驗(yàn)室分析人員都應(yīng)該熟練掌握并應(yīng)用HPLC，對(duì)于一些常見(jiàn)的故障分析應(yīng)該做到游刃有余，才能在運(yùn)行故障的時(shí)候即使解決問(wèn)題，提高工作效率。小編整理了HPLC的發(fā)展史哦，不要錯(cuò)過(guò)哦。

對(duì)于一些色譜工作人員來(lái)說(shuō)，他們對(duì)高效液相層析法的認(rèn)識(shí)還是要從很久以前的1969年說(shuō)起。那一年，他們來(lái)到拉斯維加斯參加第五屆由休息頓大學(xué)的化學(xué)家Albert Zlatkis組織的系列會(huì)議。

大致粗算了一下，今年是我們所了解的高效液相層析法或者簡(jiǎn)稱為HPLC技術(shù)走過(guò)的第50個(gè)年頭。關(guān)于HPLC的故事，從一開(kāi)始他就像是一場(chǎng)關(guān)于層析技術(shù)的進(jìn)步而不是技術(shù)的革命。這次，我們將重訪HPLC走過(guò)的50年光景，同時(shí)回顧一下有關(guān)層析法的所有粒子填充柱技術(shù)的增量式開(kāi)發(fā)。之后，我們找來(lái)了那些在柱填充材料和壓力方面做出卓越貢獻(xiàn)的公司和研究人員與我們共同展望了HPLC處理速度更快，處理樣本更復(fù)雜的未來(lái)的發(fā)展前景。

早年期間的“色譜研究進(jìn)展”會(huì)議聚焦了氣相色譜技術(shù)（GC），這種技術(shù)可以在混合物流經(jīng)充氣柱的時(shí)候，分離混合物中的易揮發(fā)性化合物。所以在1969年的很多與會(huì)人員都是GC技術(shù)大佬，而且他們也沒(méi)有聽(tīng)過(guò)關(guān)于HPLC技術(shù)過(guò)多的說(shuō)法。但是在這屆會(huì)議上這些技術(shù)大佬們開(kāi)始覺(jué)悟。“這屆會(huì)議對(duì)于HPLC的誕生而言起到了極其重要的作用，” Ronald Majors說(shuō)，他是當(dāng)年參加會(huì)的人員之一。在人們聽(tīng)到這個(gè)仍處于萌芽期的技術(shù)之后，“每個(gè)人都興奮至極。”

在那個(gè)年代，GC仍舊占據(jù)分離技術(shù)的主導(dǎo)地位。但是GC的確存在一些短處。最要命的，就是GC要求被分離的物質(zhì)要具備揮發(fā)性，或者借助衍生作用將被分離物質(zhì)變成易揮發(fā)性質(zhì)。“但是演化反應(yīng)真的是一個(gè)讓人崩潰的過(guò)程，” Majors說(shuō)。因此很多大型或者極性分子無(wú)法使用GC技術(shù)分析。

但是GC不能分析的物質(zhì)可以使用HPLC進(jìn)行分離。在HPLC的處理過(guò)程中，液體移動(dòng)相會(huì)攜帶者化合物的混合物通過(guò)一段填充有顆粒物的色譜柱。當(dāng)泵壓促使移動(dòng)相通過(guò)色譜柱的時(shí)候，化合物會(huì)與靜止相放生相互作用，也就是說(shuō)會(huì)和色譜柱中的顆粒物表面接觸發(fā)生不同程度的反應(yīng)，這樣化合物就在這個(gè)過(guò)程中被成功分離。

那一年，會(huì)議上初露頭角的HPLC技術(shù)可謂是不費(fèi)吹灰之力就贏得了在場(chǎng)科學(xué)家的極度關(guān)注，因?yàn)樵谶@次會(huì)議上有很多像藥物研發(fā)和生物技術(shù)分離等應(yīng)用技術(shù)，但是GC這樣的方法真的很難滿足這些應(yīng)用技術(shù)的分離目的。因此，從那一天開(kāi)始，HPLC注定成為分析化學(xué)實(shí)驗(yàn)室的一匹黑馬。在那之后，從手性分離到蛋白質(zhì)組學(xué)的應(yīng)用，不斷地推動(dòng)當(dāng)今HPLC技術(shù)的進(jìn)步。

即使在1969年，HPLC的知名度相對(duì)不高，之后，來(lái)自聯(lián)合石油公司的Lloyd Snyder想起了Zlatkis組織的那次會(huì)議成為了HPLC技術(shù)出現(xiàn)的轉(zhuǎn)折點(diǎn)。但是當(dāng)他回到家后才回想起在會(huì)議上發(fā)生的更多的事情。于是他和其他參加這次會(huì)議的人一起在加州大學(xué)組織了一場(chǎng)為期半天時(shí)間的會(huì)議，讓那些未能參加那次會(huì)議的人員們提供了關(guān)于HPLC的信息。

“我們打算讓15到20個(gè)人來(lái)參加我們的會(huì)議，”Snyder說(shuō)。“他們廣播了這次會(huì)議的舉辦地點(diǎn)和時(shí)間，并安排這次會(huì)議在平時(shí)我們使用的教室里面進(jìn)行。當(dāng)收到會(huì)議通知的人趕到的時(shí)候，我們不得不將會(huì)議場(chǎng)所臨時(shí)更改，選擇一個(gè)可以容納更多人的會(huì)議室。大約有150人前來(lái)參加我們的會(huì)議。我發(fā)現(xiàn)這件事成為了當(dāng)時(shí)熱議的話題。”

根據(jù)某些官方數(shù)據(jù)估算，今年是HPLC技術(shù)誕生的第50個(gè)年頭。這些估算主要是根據(jù)耶魯大學(xué)的Csaba Horváth和Seymour (Sandy) Lipsky在1966年發(fā)表的一片關(guān)于有機(jī)化合物的離子交換分離技術(shù)（Nature 1966, DOI:10.1038/211748a0）的發(fā)表時(shí)間算起。一年后，他們又發(fā)表了一篇研究報(bào)告。在這次研究當(dāng)中，他們?cè)诳焖僖合嗌V技術(shù)當(dāng)中使的泵操作壓力要比上一次實(shí)驗(yàn)（Anal. Chem.1967, DOI: 10.1021/ac60256a003)的壓力高很多。他們就是那次在拉斯維加斯舉辦的具有標(biāo)志性意義年會(huì)當(dāng)中的先驅(qū)。

但是確認(rèn)HPLC準(zhǔn)確的出現(xiàn)時(shí)間并不容易。有人曾經(jīng)預(yù)料，不久之后HPLC就得到了實(shí)踐應(yīng)用。在1941年，之后的諾貝爾獎(jiǎng)得主Archer J. P. Martin和Richard L. M. Synge在文章中寫道了一種液-液分配色譜法，色譜柱分離化合物的能力取決于液體-流動(dòng)相的流速，以及色譜柱內(nèi)填充顆粒物的直徑平方。他們從理論塔板數(shù)（theoretical plates）的角度談?wù)摿诉@種技術(shù)，理論塔板數(shù)經(jīng)常被色譜工作人員用來(lái)描述則鋪筑所能夠解決的混合物的性能。

因此人們最早知道的關(guān)于液相色譜分離技術(shù)是在1941年，人們知道這種技術(shù)需要高壓與微小顆粒填充物的結(jié)合才能實(shí)現(xiàn)該技術(shù)。但是這種技術(shù)卻花費(fèi)了將近30年的時(shí)間從書本的理論層面跳到現(xiàn)實(shí)的使用當(dāng)中，因?yàn)槿藗冇X(jué)得這種技術(shù)的實(shí)現(xiàn)需要很多知識(shí)。